第八章

第四节

参考答案

1.膜片钳技术是一种主要用于检测细胞膜离子通道活动的电生理技术，按工作方式可区分为电压钳和电流钳两种。其中，电压钳最常用，它是对细胞膜电位进行人为控制，钳制于某一固定水平电位上，或在此基础上再施以阶跃式或斜坡式电压刺激，同时记录跨膜电流，从而分析细胞膜离子通道的活动。而电流钳即人为控制经微电极对细胞进行注射的电流，并记录膜电位及其变化。若注射电流为零，则用于测量细胞膜静息电位；若注射方波脉冲刺激电流，则用于诱发、观测动作电位。另外，膜片钳技术还常用于观测细胞膜电容, 从而推测分泌细胞的活动情况。

2.根据膜片钳实验中受检细胞膜形式的不同，又可将膜片钳分为全细胞式、细胞贴附式、内面朝外式和外膜向外式四种模式。

3.膜片钳在应用过程中普遍存在着电学噪声干扰和机械干扰。

电学噪声干扰主要是来自放大器以外的外源噪声。外源噪声可分为辐射噪声、地环路噪声和磁感应噪声。处理方法：使用屏蔽笼，将所有连接在一起的屏蔽层与放大器的信号相连后接地线，电源远离敏感电路降低磁感应噪声，并用细金属网或锡箔纸等包裹电源线，形成一个附加的屏蔽层。

机械干扰处理：首先必须拥有良好缓冲性能的防震台，可以有效隔离来自地面的垂直震动。此外，在膜片钳实验中使用的记录微操必须坚固紧凑，其移动部分（包括微操、夹持器、电极尖端、Chamber中的细胞）应尽可能短。微操应最好直接安装在显微镜加宽平台上。放大器探头应直接固定在微操上，要极力避免头重脚轻的结构，防止产生惯性震颤。

4.膜片钳实验中保持脑片活性要注意以下几点：分离脑组织时务必迅速；切片时尽快切到目的脑区；脑片恒温孵育时务必提前半小时通混合氧，以便尽早达到氧饱和；循环体系中也不能忘通氧；脑片转移时使用胶头吸管，尽量不要碰触组织。